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DNA线性化。21.为了用内切核酸酶PI-Sce[广州找人代孕-广州供卵代孕【正规代孕机构】消化线性BAC DNA,在一个微量离心管中试剂轻轻混合，37°C温育至少5~6h。22.移取20mL BAC注射液到-一个无菌的培养皿中，上面漂浮放置- - 张25mm的0.025μm孔径的微孔滤膜，光面向上。将50uL来自步骤21的线性BAC DNA反应液加到滤膜上，用盖子覆盖培养皿。在室温下，使缓冲液透析4~6 h。23.转移滤膜上面含有DNA的溶液到一个微量离心管中，然后加入足量的注射缓冲液使溶液恢复到原始体积50μL。在4'C保存DNA。24.如方案3介绍，通过脉冲电场凝胶电泳分析DNA,确定其浓度。透析和显微注射的间隔时间不应超过7d。